A.De Almeida Figueira[A], M. Meloni Da Silva[A], R. Lima Silva[A], L. Dos Santos Machado[A], D. Lima da Costa Abreu[A], N. Maria Soares[B], V. Leo De Almeida Pereira[A], E. Rosendo do Nascimento[A]
[A] Факультет ветеринарного дела и общественного здравоохранения, Федеральный университет Флуминенсе, Рио-де-Жанейро, Бразилия
[В] Институт биологии (АРТА), Бастос, Сан-Паулу, Бразилия
РЕЗЮМЕ
Технический прогресс в яичном птицеводстве способствовал повышению продуктивности и эффективности отрасли, однако это привело к появлению у кур-несушек респираторных заболеваний. Целью настоящей работы является использование ПЦР и ПЦР-РВ для диагностики этиологических факторов респираторного синдрома у кур-несушек с респираторными симптомами путём выявления основных возбудителей. Возбудители респираторных заболеваний вызывают схожие симптомы и могут поражать птицу одновременно, в основном на фермах c выгульным содержанием из-за высокой плотности посадки и при неэффективности мер биобезопасности и ухода. Доказано, что молекулярная диагностика позволяет эффективно и быстро выявить одного или нескольких возбудителей респираторных заболеваний у промышленных кур-несушек. Подтверждено, что респираторный синдром у кур-несушек имеет смешанную этиологию; наиболее распространённым его возбудителем является MS, затем следуют MG, IBV и ORT, а также сочетанные инфекции.
Введение
Яичное птицеводство получило существенное развитие как в сельском хозяйстве Бразилии [1], так и во всём мире. Согласно Бразильской ассоциации производителей животного белка, производство яиц в Бразилии в 2018 приближалось к 40 млрд штук, а страна остаётся в десятке крупнейших производителей яиц во всём мире. Интенсификация производства помогла повысить эффективность отрасли, однако в то же время способствовала росту распространённости инфекционных заболеваний. Среди них по степени наносимого отрасли ущерба выделяются респираторные заболевания [5]. Кроме того, синергия между различными возбудителями может привести к респираторному синдрому, что снижает зоотехнический потенциал кур-несушек и увеличивает затраты на лечение. В настоящее время этиологическая картина респираторного синдрома у кур-несушек малоизучена, поэтому исследования по изучению истинной распространённости этиологических факторов важны для реализации мер профилактики. Возбудители респираторных заболеваний, в частности, Mycoplasma gallisepticum (MG) и M. synoviae (MS), Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) и вирус инфекционного бронхита кур (IBV) могут взаимодействовать с синергетическим эффектом, что приводит к росту тяжести и продолжительности респираторных заболеваний [8]. Среди методов диагностики особую ценность для эпизоотического анализа этих заболеваний имеет полимеразная цепная реакция (ПЦР) в совокупности с анализом зоотехнических данных и клинических симптомов. Помимо экономической целесообразности, более высокая специфичность по сравнению с серологическими и микробиологическими методами способствовала освоению методики диагностическими лабораториями [10]. Целью настоящей работы является использование ПЦР и ПЦР-РВ для диагностики этиологических факторов респираторного синдрома у кур-несушек с респираторными симптомами путём выявления основных возбудителей.
Материалы и методы
Отобрали мазки из трахеи 140 кур-несушек с шести различных ферм (A, B, C, D, E и F), расположенных в юго-восточной части Бразилии. На ферме А 10 мазков из трахеи было отобрано в 4 стадах, а на других пяти фермах (B, C, D, E и F) мазки были отобраны в двух стадах (табл. 1). Все образцы поместили в 1 мл среды Фрея, инкубировали при температуре 37 °С в течение 12 ч., после чего направили на выделение ДНК или РНК [11]. После выделения провели количественный анализ полученного материала с помощью набора Biodrop Touch® (Biochrom, Великобритания) и провели амплификацию на наличие материала возбудителей MG (9), MS (7), ORT (4), и IBV (3). Каждый образец гомогенизировали в присутствии загрузочного буфера и GelRed®, поместили на 1,5% агарозного геля на трис-боратном буфере с ЭДТА (ТБЭ) 0,5 х и подвергли электрофорезу [14]. После электрофореза ампликоны визуализировали в проходящем УФ-излучении.
Обсуждение результатов
Среди исследованных возбудителей MS наблюдалась у 68,57% (96/140) исследованных кур и, таким образом, оказалась наиболее распространённым возбудителем на исследованных фермах, что подтверждает её высокую распространённость у кур-несушек [12, 2]. Кроме того, присутствие MG наблюдалось у 16,42% (23/140), IBV — у 10,71% (15/140), а ORT — у 5% (7/140) обследованных кур. Как ORT, так и IBV обнаружены на ферме А с распространённостью 10% (4/40) и 35% (14/40), а на ферме В — с распространённостью 15% (3/20) и 5% (1/20) соответственно (табл. 1). Доля образцов, положительных на IBV на ферме А, может являться следствием вакцинации. В случае MG инфекция не была выявлена на фермах А (0/40) и С (0/20). На фермах С и D распространённость инфекции MS была наибольшей: инфицировано 95% (19/20) и 100% (20/20) кур, однако на ферме С случаи сочетанных инфекций, вызванных исследуемыми возбудителями, отсутствовали (табл. 1).
В данной работе удалось наблюдать сочетанные инфекции, вызванные исследуемыми микроорганизмами; наиболее распространённой была инфекция MG и MS, наблюдавшаяся у 10,71% (15/140) обследованных кур (табл. 1). Из включённых в исследование ферм на фермах А и В наблюдалось наибольшее число сочетанных инфекций, вызванных изучаемыми микроорганизмами. На ферме А распространённость сочетанных инфекций у обследованных птиц составила 5% (2/40) для MS + IBV и IBV + ORT, а также 2,5% (1/40) для MS + ORT, а на ферме В — 5% для MG + IBV, MG + ORT, MG + MS и 10% (2/20) для MS + ORT (табл. 1). Синергетический эффект IBV с MS и с ORT у 5% (2/40) птиц на ферме А позволяет предположить, что этот вирус, несмотря на то, что он является вакцинным штаммом, может способствовать ухудшению респираторных симптомов (10). На фермах D, E и F распространённость сочетанной инфекции, вызванной GM и MS, составила 5% (1/20), 30% (6/20) и 35% (7/20) соответственно (табл. 1). Таким образом, сочетанная инфекция, вызванная микоплазмами и другими возбудителями, может отягощать респираторные заболевания и увеличивать их длительность [6, 10]. Исследования этиологии респираторных заболеваний, а также распространённости микроорганизмов, степени их взаимосвязи и вовлечённости в патологический процесс имеют фундаментальное значение для разработки мер профилактики и определения достаточности законодательства в области ветеринарии домашней птицы.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Молекулярная диагностика позволила эффективно и быстро выявить одного или нескольких возбудителей респираторных заболеваний у промышленных кур-несушек. Экспрессные и чувствительные методики обнаружения и различения возбудителей респираторных заболеваний кур имеют важнейшее значение для принятия мер профилактики респираторного синдрома. Показано, что возбудители MG, MS, ORT и IBV могут встречаться у кур-несушек по отдельности или совместно, в связи с респираторным синдромом. Респираторный синдром у кур-несушек в данном исследовании был результатом сочетанной инфекции; наиболее распространённым его возбудителем является MS, затем следуют MG, IBV и ORT. Сочетания этих возбудителей на шести исследованных фермах встречались наиболее часто. Эти результаты указывают на необходимость более подробного исследования этиологии респираторных заболеваний.
ЛИТЕРАТУРА
1. [ABPA] Brazilian Association of Animal Protein. Annual Report 2018. Available at: <http://abpa-br.com.br/storage/files/relatorio-anual-2018.pdf> Accessed on: 25 Aug. 2018.
2. Buim, MR, E. Mettifogo, J. Timenetsky, S. Kleven and AJP Ferreira. Epidemiological survey of Mycoplasma gallisepticum and M. synoviae by multiplex PCR in commercial birds. Brazilian Veterinary Research, 29: 552-556. 2009.
3. Callison, SA, DA Hilt, To Boynton, BF Sample, R Robison, DE Swayne and MW Jackwood. Development and evaluation of a real-time Taqman RT-PCR assay for the detection of infectious bronchitis virus from infected chickens. J. Virol. Methods, 138: 60-65. 2006.
4. Chansiripomchai, N., W. Wanasawaeng and J. Sasipreeyajan. Seroprevalence and identification of Ornithobacteriumrhinotracheale from flocks of broiler chickens and broilers in Thailand. Avian Diseases, 51: 777-780.2007.
5. Gama, N.M.S. Laryngotracheitis: the Brazilian case. In: APINCO Conference on Poultry Science and Technology, 2004, Santos, Säo Paulo. FACTA, 2004, p. 85-92.
6. Kleven, SH Mycoplasmas in the etiology of multifactorial respiratory disease. Poultry Science, 77: 1146-1149. 1998.
7. Lauerman, LH, FJ Hoerr, AR Sharpton, SM Shah and VL van Santen. Development and Application of a Polymerase Chain Reaction Assay for Mycoplasma synoviae. Avian Diseases, 37: 829,1993.
8. Matthijs, MGR, MP Ariaans, RM Dwars, JHH van Eck, A. Bouma, A. Stegeman and L. Vervelde. Course of infection and immune responses in the respiratory tract of chickens infected by IBV after superinfection with E. coli. Veterinary Immunology and Immunopathology, 127: 77-84. 2009.
9. Nascimento, ER R. Yamamoto, KR Herrick and RC Tait. Polymerase Chain Reaction for Detection of Mycoplasma gallisepticum. Avian Diseases, 35: 62,1991.
10. Pang, Y., H. Wang, T. Girshick, Z. Xie and MI Khan. Development and Application of Multiplex Polymerase Chain Reaction for Avian Respiratory Agents. Avian Diseases, 46: 691-699.2002.
11. Sambrook, J., E. Fritsch and T. Maniatis. Molecular cloning: A laboratory manual: vol. 2.2, ed. Cold Spring Harbor, SI 1989.
12. Teixeira, V. C. M., D. de Q. Baptista, F. C. Carlos, W. R de Menezes, D. S. Jose, M. L. Barreto, D. L. da C. Abreu, V. L. de A. Pereira, and E. R D. Nascimento. Epidemiological situation of avian mycoplasmosis in the State of Rio de Janeiro. Brazilian Journal of Veterinary Medicine, 37: 379385,2015.
Таблица 1. Распространённость инфекций, вызванных Mycoplasma gallisepticum (MG), M. synoviae (MS), Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) и вирусом инфекционного бронхита кур (IBV) у промышленных кур-несушек.
| Возбудители | Ферма А | Ферма В | Ферма C | Ферма D | Ферма E | Ферма F | Итого |
| Простая инфекция | |||||||
| Сочетанная инфекция | Ферма А | Ферма В | Ферма C | Ферма D | Ферма E | Ферма F | Итого |
| MG | 0/40 | 2/20 | 0/20 | 1/20 | 7/20 | 13/20 | 23/140 |
| (0%) | (10%) | (0%) | (5%) | (35%) | (65%) | (16,42%) | |
| MS | 15/40 | 15/20 | 19/20 | 20/20 | 16/20 | 11/20 | 96/140 |
| (37,5%) | (75%) | (95%) | (100%) | (80%) | (55%) | (68,57%) | |
| ORT | 4/40 | 3/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 7/140 |
| (10%) | (15%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (5%) | |
| IBV | 14/40 | 1/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 15/140 |
| (35%) | (5%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (10,71%) | |
| MG +IBV | 0/40 | 1/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 1/140 |
| (0%) | (5%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0,71%) | |
| MG + ORT | 0/40 | 1/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 1/140 |
| (0%) | (5%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0,71%) | |
| MG + MS | 0/40 | 1/20 | 0/20 | 1/20 | 6/20 | 7/20 | 15/140 |
| (0%) | (5%) | (0%) | (5%) | (30%) | (35%) | (10,71%) | |
| MS + ORT | 1/40 | 2/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 3/140 |
| (2,5%) | (10%) | (0%) | (0) | (0%) | (0%) | (2,14%) | |
| MS + IBV | 2/40 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 2/140 |
| (5%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (1,42%) | |
| IBV + ORT | 2/40 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 0/20 | 2/140 |
| (5%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (0%) | (1,42%) |
Читайте также
Совместная образовательная программа «ЖИВОТНОВОДСТВО БУДУЩЕГО» компании MSD Animal Health и Центра развития здравоохранения Московской школы управления CКОЛКОВО
В октябре 2020 года компания MSD Animal Health совместно с Центром развития здравоохранения Московской школы управления СКОЛКОВО организовала образовательный курс «Животноводство Будущего». Двухнедельная образовательная программа была нацелена на руководителей и ключевых сотрудников предприятий-лидеров российской сельскохозяйственной отрасли. Вместе мы постарались найти ответы на вопросы: «какие изменения ждут животноводство в новом десятилетии?» и «что нужно, чтобы к ним подготовиться?»
Состоялась финальная лекция онлайн-марафона «Секреты инкубации» доктора Мейерхофа
В среду, 16 сентября, состоялась шестая лекция совместного марафона MSD и доктора Рона Мейерхофа об инкубации цыплят. Темой завершающего занятия стали особенности брудинга и транспортировки цыплят.